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薄層色譜法的操作方法包括薄層色譜硅膠板的選用、點樣、展開、顯色、檢視與記錄五個步驟。同時，在使用過程中，經常會遇到拖尾、邊緣效應、S形及波形斑點、念珠狀斑點及Rf值不穩定等問題。
目前，實驗室已普遍采用市售高效薄層板，以硅膠G型板最為常見，相對于自制薄層板來說分離效果更好。
由于硅膠表面的pH值約為5，比較適合于酸性和中性物質的分離，如有機酸、酚類、醛類等。堿性物質能與硅膠作用，展開時易被吸附于原點不動或出現斑點拖尾現象。在自制薄層板時可用稀堿溶液制備薄層使其變為堿性，或用堿性展開劑展開，從而得到理想的圖譜。
對薄層板的質量要求：厚度均勻一致、表面平整光滑、無麻點氣泡、無破損污染。自制薄層板時，要控制好鋪板用的勻漿稠度，過稠則板面容易出現層紋，過稀則干后表面粗糙；使用前一般應于110℃下活化30 min，活化后置干燥器中備用。市售板在陰涼干燥處保存，可直接使用。
Rf值不穩定的各因素：
1.溫濕度
溫濕度不穩定。層析時室溫差控制在5℃之間。其他條件相同，溫度低比溫度高展開慢，分離好。濕度可能主要影響薄層板的吸附能力，導致選擇性( 容量因子) 的變化。濕度應根據實際情況確定，可通過反復實驗進行相應的調整。一般來說，濕度較低時，分離效果較好。
2.展開劑
展開劑的極性越大，對待定化合物的洗脫能力也越大。
3.薄層厚度
板厚度變化對比移值影響明顯。厚度達0.2mm時，影響較小；在0.25mm，分離效果最佳。
4.吸附劑含水量
與吸附劑的種類、使用時的加水量、風干時間、活化溫度、活化時間等因素有關。
5.層析缸中蒸汽
缸中蒸汽未達飽和時，比移值不能重現。為使缸中蒸汽飽和，可以在缸內壁附上一層濾紙，讓展開劑全部濕潤；把展開劑放入層析缸一段時間后再放薄層板；盡可能在恒定溫度下層析。
6.其他因素
展開劑的pH、展開時間、展開距離、樣品濃度、點樣量、薄層板所用吸附劑中的粘合劑的種類和用量等。
以上就是薄層色譜硅膠板小編的介紹，希望對大家有所幫助。
