薄層色譜法的操作方法包括薄層色譜硅膠板的選用、點樣、展開、顯色、檢視與記錄五個步驟。同時，在使用過程中，經常會遇到拖尾、邊緣效應、S形及波形斑點、念珠狀斑點及Rf值不穩定等問題。

薄(bo)層板的選用：

目前，實驗室已(yi)普遍采用(yong)市售(shou)高效薄(bo)層(ceng)板(ban)，以(yi)硅膠(jiao)G型板(ban)最(zui)為常見，相對于(yu)自(zi)(zi)制薄(bo)層(ceng)板(ban)來說分離效果更好。由于(yu)硅膠(jiao)表面的pH值約為5，比(bi)較適合于(yu)酸性(xing)(xing)和(he)中性(xing)(xing)物(wu)質的分離，如(ru)有機酸、酚類、醛類等。堿性(xing)(xing)物(wu)質能與硅膠(jiao)作用(yong)，展(zhan)開(kai)時易被吸附于(yu)原(yuan)點不(bu)動或(huo)出現斑點拖尾現象。在自(zi)(zi)制薄(bo)層(ceng)板(ban)時可用(yong)稀堿溶(rong)液制備薄(bo)層(ceng)使其(qi)變為堿性(xing)(xing)，或(huo)用(yong)堿性(xing)(xing)展(zhan)開(kai)劑(ji)展(zhan)開(kai)，從而(er)得到理想(xiang)的圖(tu)譜。

對薄層板的質量要求：厚度均勻(yun)一致、表(biao)面(mian)平整光滑、無麻(ma)點(dian)氣泡、無破損污(wu)染。自制(zhi)薄層板時，要控(kong)制(zhi)好鋪板用的勻(yun)漿稠(chou)度，過(guo)稠(chou)則板面(mian)容易出現層紋，過(guo)稀則干(gan)后表(biao)面(mian)粗(cu)糙；使用前一般應(ying)于110℃下活化(hua)30 min，活化(hua)后置干(gan)燥(zao)器(qi)中備用。市售板在陰涼干(gan)燥(zao)處保存(cun)，可直接(jie)使用。

Rf值(zhi)不穩定(ding)的各因素：

1.溫濕度(du)

溫濕(shi)度(du)(du)不穩定(ding)。層析時室溫差控(kong)制在5℃之間。其他條件相同，溫度(du)(du)低(di)比溫度(du)(du)高展(zhan)開慢，分(fen)離好。濕(shi)度(du)(du)可能主(zhu)要影響薄(bo)層板的吸附能力，導(dao)致(zhi)選擇(ze)性( 容量因子) 的變化。濕(shi)度(du)(du)應(ying)根(gen)據(ju)實際情況確定(ding)，可通過反復實驗進行相應(ying)的調整。一般來說，濕(shi)度(du)(du)較低(di)時，分(fen)離效果較好。

2.展(zhan)開劑

展(zhan)開劑的(de)極性越大(da)，對(dui)待定(ding)化合物(wu)的(de)洗脫能力也越大(da)。

3.薄層厚度(du)

板(ban)厚度變化對比移(yi)值影響明顯。厚度達0.2mm時，影響較小(xiao)；在0.25mm，分離效(xiao)果最佳。

4.吸附劑含水量

與吸(xi)附(fu)劑(ji)的種類、使用時的加水量、風干時間(jian)、活化溫(wen)度、活化時間(jian)等因(yin)素有關。

5.層析缸中蒸汽(qi)

缸(gang)中蒸汽(qi)未達飽(bao)和(he)時(shi)，比移(yi)值不能重(zhong)現(xian)。為使缸(gang)中蒸汽(qi)飽(bao)和(he)，可以在缸(gang)內壁附上一層(ceng)(ceng)濾紙，讓(rang)展開(kai)劑(ji)全(quan)部濕潤；把展開(kai)劑(ji)放入層(ceng)(ceng)析缸(gang)一段時(shi)間后再放薄層(ceng)(ceng)板；盡可能在恒定溫度(du)下(xia)層(ceng)(ceng)析。

6.其他因(yin)素

展開劑的(de)pH、展開時間、展開距離、樣品濃度(du)、點(dian)樣量(liang)、薄層(ceng)板所用吸(xi)附劑中的(de)粘(zhan)合劑的(de)種(zhong)類和(he)用量(liang)等。

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