1.稱量(liang)：200-300目硅(gui)膠(jiao)，稱30-70倍于(yu)上(shang)樣量(liang)，如果極(ji)難(nan)分，也(ye)可以用(yong)100倍量(liang)的硅(gui)膠(jiao)H。干硅(gui)膠(jiao)的視(shi)密度(du)在(zai)0.4左右，所以要稱40g硅(gui)膠(jiao)，用(yong)燒杯量(liang)100ml也(ye)可以。

2.攪成勻(yun)漿：加入干(gan)硅膠體積一倍的(de)溶(rong)劑(ji)用(yong)玻璃棒(bang)充分(fen)攪拌(ban)，如(ru)(ru)果洗(xi)脫劑(ji)是石(shi)油醚(mi)/乙(yi)酸(suan)乙(yi)酯(zhi)丙酮體系(xi)，就用(yong)石(shi)油醚(mi)拌(ban)，如(ru)(ru)果洗(xi)脫劑(ji)是氯仿醇體系(xi)，就用(yong)氯仿拌(ban)，如(ru)(ru)果不能(neng)攪成勻(yun)漿，說明溶(rong)劑(ji)中(zhong)含水(shui)量(liang)太大，尤其是乙(yi)酸(suan)乙(yi)酯(zhi)/丙酮，如(ru)(ru)果不與(yu)水(shui)配伍(wu)走分(fen)配色譜的(de)話，必須預先用(yong)無(wu)(wu)水(shui)硫酸(suan)鈉久置干(gan)燥。氯仿用(yong)無(wu)(wu)水(shui)氯化鈣干(gan)燥，以除去1%的(de)醇。如(ru)(ru)果樣(yang)品(pin)對酸(suan)敏感，不能(neng)用(yong)氯仿體系(xi)過(guo)柱。

3.裝柱：將(jiang)柱底(di)用棉花塞(sai)緊，不(bu)必用海沙，加入(ru)約1/3 體積石(shi)油醚(氯仿)，裝上蓄(xu)(xu)液球，打開柱下活塞(sai)，將(jiang)勻漿一次傾入(ru)蓄(xu)(xu)液球內(nei)，隨著沉(chen)降，會有(you)一些(xie)硅膠(jiao)沾在蓄(xu)(xu)液球內(nei)，用石(shi)油醚(氯仿)將(jiang)其沖入(ru)柱中。

4.壓(ya)(ya)實：沉降完成后(hou)，加入更多的石(shi)油醚，用雙聯球或氣泵加壓(ya)(ya)，直至流速(su)恒定，柱床約被(bei)壓(ya)(ya)縮(suo)至9/10體積，無論走常壓(ya)(ya)柱或加壓(ya)(ya)柱，都應(ying)進行這一步，可使分(fen)離度提高很多，且(qie)可以避免過柱時由于柱床萎縮(suo)產生開裂。

5.上樣：干法濕法，海沙是沒必要的(de)。上樣后(hou)，加(jia)入一些洗(xi)脫劑(ji)，再將一團脫脂棉塞至接(jie)近硅(gui)膠表(biao)面(mian)，然后(hou)就可以放(fang)心(xin)地加(jia)入大量洗(xi)脫劑(ji)，而不會沖(chong)壞硅(gui)膠表(biao)面(mian)。壓實：沉降完成(cheng)后(hou)，加(jia)入更多的(de)石油醚，用(yong)雙聯球或氣(qi)泵加(jia)壓，直(zhi)至流速恒定，柱(zhu)(zhu)(zhu)床約被壓縮至9/10體積(ji)，無論走常壓柱(zhu)(zhu)(zhu)或加(jia)壓柱(zhu)(zhu)(zhu)，都(dou)應(ying)進行這一步，可使分離度提(ti)高很多，且可以避免過柱(zhu)(zhu)(zhu)時由于柱(zhu)(zhu)(zhu)床萎縮產生開裂。

6.過柱(zhu)和(he)收(shou)集(ji)：柱(zhu)層析實際(ji)上是在(zai)擴散和(he)分(fen)離之間(jian)的(de)權衡(heng)，太(tai)低(di)的(de)洗脫強(qiang)度(du)并(bing)不好，推薦用(yong)梯度(du)洗脫。收(shou)集(ji)的(de)例(li)子：10mg.上樣量，1g硅(gui)膠(jiao)H,0.5ml收(shou)—餾分(fen)，1-2g上樣量，50g硅(gui)膠(jiao)(200-300目(mu)),20-50ml收(shou)—餾分(fen)。

7.檢測：更多地使用(yong)(yong)專用(yong)(yong)噴顯(xian)劑(ji)，如果僅用(yong)(yong)紫外燈，會(hui)損(sun)失較多產品，紫外的靈敏度-般比噴顯(xian)劑(ji)底1-2個數量級(ji)。

8.送(song)譜(pu)(pu)：收集(ji)的產品(pin)旋(xuan)干，在送(song)譜(pu)(pu)前通常(chang)需要(yao)重結晶。如果(guo)樣品(pin)太少(shao)或為液體(ti)，可過一-小凝膠(jiao)柱，作為送(song)譜(pu)(pu)前的最(zui)后(hou)純化手段。可除去氫(qing)譜(pu)(pu)1.5ppm左右所謂的“硅膠(jiao)"峰。